病毒在包装完成后，会经历纯化与浓缩的过程，那么病毒为什么一定要纯化呢？接下来讲一下病毒纯化的原因：

（1）病毒培养液中含有大量杂质，包括缺损颗粒、病毒外壳、细胞毒素、培养基、血清以及细胞碎片等，这些杂质若被注入动物体内，会引起宿主强烈的免疫反应；

（2）纯化有利于病毒悬浮于体内注射的缓冲液中。
但是纯化不仅仅只是达到使病毒液纯净的目的，也要保证病毒的感染性。所以病毒纯化的原则：以保持病毒的生物活性和感染性为前提，释放病毒到胞外，去除非病毒杂质，提取出高纯度的病毒。

问:

病毒纯化有什么方法呢?

1.沉淀法

主要是从稀的病毒悬浮液中浓缩病毒。如聚乙二醇沉淀法，用于病毒沉淀的分子量使2000-6000，PEG可使病毒颗粒形成多聚体，较低离心力可使病毒沉淀。
2.层析法

利用物质中各组分的理化性质差异，使各组分在固定相和流动相中的分布程度和移动速度不同，从而达到分离的目的。常用的层析法有凝胶层析法、离子交换层析法和亲和层析法。
3. 吸附法

利用病毒颗粒或杂质的表面离子与吸附剂之间的亲和作用，将病毒或杂质吸附后，用一定的盐溶液将病毒或杂质洗脱下来。常用的吸附剂有红细胞、磷酸钙、离子交换树脂等。

注意：吸附剂应有较大的表面积和吸附能力，性质稳定并便于洗脱。


4. 超过滤法

利用超滤膜将水、盐和小分子滤除，将大分子或病毒等颗粒截留，从而达到纯化的目的，该方法主要用于大容量病毒样品的浓缩，且回收率高。常用的超滤膜是硝酸纤维素滤膜。

注意：超滤膜孔径一定要比病毒颗粒小，且只能去除比病毒小的细胞碎块。


5. 离心法

离心法包括差速离心法和梯度离心法。差速离心法适合分离沉降速度差别较大的粒子。密度梯度离心法，密度梯度离心将样品加在惰性密度梯度介质（如氯化铯，蔗糖）上进行超速离心，在一定的离心力下把样品颗粒分配到密度梯度介质中相等密度层中，吸出目的颗粒所在的介质层，达到分离纯化的目的。

问:

目前慢病毒常用的纯化方法是离心法和沉淀法，腺病毒常用的纯化方法是梯度离心法，腺相关病毒常用的纯化方法是沉淀法和梯度离心法，那对于实验小白来讲有没有更方便的方法呢？

答案是当然有了，给大家介绍一下病毒纯化的试剂盒，先介绍一下北京奥秘佳得医药科技有限公司生产的慢病毒纯化试剂盒，该试剂盒的作用原理是磁珠吸附慢病毒颗粒，进而被特定的洗脱液洗脱下来，就可以得到纯化的慢病毒了；日本的Takara公司生产的Adeno-X Maxi 纯化试剂盒可以用于纯化腺病毒，该试剂盒基于色谱系统，采用层析的方法进行腺病毒的纯化；日本的Takara公司生产的AAVpro Purification Kits采用亲和层析的方法用于纯化腺相关病毒，该试剂盒分为两种，一种适用于所有的血清型，另一种适用于AAV2血清型病毒。




大家可以根据上面介绍的内容合理选择纯化方法，有关于病毒纯化的内容就介绍到这里了。

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