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基因编辑平台
CRISPR-Cas9目前已经成为生命科学领域最炙手可热的研究工具。 CRISPR-Mega TM 是镁伽鲲鹏实验室在CRISPR-Cas9系统基础上自主开发的基因编辑技术。
概述
CRISPR-Cas9目前已经成为生命科学领域最炙手可热的研究工具
CRISPR-MegaTM是镁伽鲲鹏实验室在CRISPR-Cas9系统基础上自主开发的基因编辑技术。
镁伽鲲鹏实验室提供以CRISPR-MegaTM技术为基础制做的细胞系
包括基因敲除细胞系、基因敲入细胞系、基因编辑点突变细胞系和CRISPR质粒构建服务。
CRISPR-MegaTM对从gRNA设计、载体构建、到单克隆筛选的各个流程进行优化
使得基因编辑效率显著领先于行业水平。同时结合镁伽实验室自主研发的MegaLab自动化细胞培养与筛选系统,可实现在多种复杂细胞系中高效率的基因敲除、敲入、突变等基因编辑操作。
CRISPR/Cas9是一种基于细菌天然免疫机制开发的基因编辑技术
经简化改造的CRISPR系统由核酸内切酶Cas9和gRNA ( Guide RNA, gRNA ) 两部分组成。Cas9能识别并结合基因组上的原间隔序列临近基序 ( Protospacer adjacent motif, PAM ) 并形成DNA双链解旋,与此同时gRNA的crRNA部分能与PAM上游序列成功互补配对,Cas9将激活其核酸内切酶活性,在PAM上游特定位置形成双链DNA断裂 ( Double strand break, DBS ) 。DBS可激活细胞的DNA损伤修复机制,非同源性末端结合( Non-homologous End Joining, NHEJ ) 或同源重组介导的修复 ( Homologydirected repair, HDR ) 。NHEJ,即易错修复,会在修复位点引起随机插入或缺失,造成移码突变,使得基因不再表达,由此形成基因敲除。HDR,即精准修复,能借助外源引入的单链或双链DNA为模板介导基因替换或插入,这种方式可以将一段DNA序列精准地插入特定的基因组位点,由此完成基因敲入或替换。
基因编辑平台
基于CRISPR高效、简便的基因编辑技术,该平台可广泛应用于生物领域:
基因功能发现
对内源基因进行特异性地敲除或敲入后进行表型分析;
信号通路分析
对信号通路中的蛋白进行扰动或加入标记,探索信号通路中蛋白作用的上下游关系;
蛋白改造与优化
为蛋白加上标签或特定序列,优化筛选功能蛋白,理解蛋白间相互作用;
抗体验证
良好的抗体对很多生物学研究至关重要,但大部分商业抗体均未进行严格验证,通过敲除或突变可以筛除抗体非特异信号导致的假阳性;
疾病模型构建
建立疾病突变的细胞模型或动物模型,进行药物筛选或功能机理研究。
 

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